Главная / Новости (Журнал «КТ») /
« 24.05.2004 »
Архив

В майском Nature Medicine опубликовано интересное исследование по изучению поведения гемопоэтических клеток при их введении мышам с экспериментальным инфарктом миокарда.

Гемопоэтические клетки (ГК), используемые для трансплантации имели Lin(-)/c-kit(+) - фенотип. Эффективность трансплантации клеток сравнивали с их мобилизацией цитокинами в кровоток. Исследования проводили на 2 моделях инфаркта - перевязка коронароной артерии и криодеструкция. Для идентификации клеток использовали трансгенных мышей и трансгенный (по GFP+) костный мозг.

Оказалось, что сам факт инфаркта (острого повреждения органа) не вызывает мобилизации ГК из костного мозга в миокард, однако их количество в кровотоке увеличивается, но гораздо меньше, чем при цитокиновой мобилизации (группа контроля). При последней единичные клетки всё-же находили в инфацированном миокарде.

При интрамиокардиальном введении GFP-трансгенных ГК (под бета-актиновым промотером) в количестве 1 млн. был подтверждён их engraftment (внедрение) в инфацированный миокард на 9 сутки, описанный в классической работе Orlic D (2001). Однако, уровень engraftment(а) оставался крайне низким на 28 сутки после повреждения. Все введённые клетки в период 9-28 дн. имели фенотип GFP(+)/CD45(+) - т.е. сохраняли все признаки ГК, но не не имели кардиомиоцитарных маркёров - alpha-actinin(-), troponin T(-), connexin 43 (-), Nkx2.5(-). Повторная трансплантация ГК так же не подтвердила возможность их трансдифференцировки в кардиомиоциты.

Для изучения эффективности мобилизации GFP-трансгенный костный мозг и ГК пересаживали летально облучённым мышам, после чего, через 6 недель моделировали инфаркт миокарда. Цитокиновую мобилизацию ГК производили как до, так и после повреждения. На 9 и 28 сутки наблюдался довольно высокий уровень engraftment(а), но без признаков трансдифференцировки клеток (с сохранением исходного фенотипа) как при лигировании коронарной артерии, так и при криодеструкции. Только после трансплантации всего GFP(+)-костного мозга с последующим повреждением миокарда и цитокиновой мобилизацией, исследователи обнаружили малое количество "зелёных" клеток, имеющих поперечную исчерченность и экспрессирующих маркёры кардиомиоцитов (alpha-actinin, alpha-actin, cardiac troponin T, connexin 43). Эти клетки идентифицировали на 28 сутки после повреждения, вне зоны инфаркта, с частотой 0.75% всех GFP(+)-клеток и 0.0065% всех кардиомиоцтов. Багодаря использованию трансгенных мышей (мыши-реципиенты были трансгенны по LacZ), установили, что большая часть этих клеток возникла из-за слияния донорских ГК и хозяйских кардимиоцитов, но не путём трансдифференцировки.

Таким образом, эффект трансплантации и мобилизации ГК при инфаркте миокарда объясняется чем угодно, кроме их прямой трансдифференцировки в кардиомиоциты и слияния с клетками хозина, т.к. частота этих событий ничтожно низка. В то время, как клиницисты с "остервенением" продолжают активно эксплуатировать метод клеточной кардиомиопластики, появляется всё большее количество экспериментальных работ, проливающих свет на механизм действия-бездействия введённых клеток. Так, становится понятным, что трансплантация ГК в чистом виде (что как раз и делается в большинстве клиник), по-видимому, не имеет смысла. Возможно нужно "искать счастья" в эндотелиальных прогениторах (ангиогенез!) и мезенхимальных клетках костного мозга.

По материалам
NatMed 2004; 10; 5: 494-501
 

скачать здесь

Engraftment цитокин-мобилизованных трансгенных (beta-actin+/GFP+) ГК в инфацированный миокард. Кардиомиоциты окрашены на alpha-actinin (красные), лежат отдельно от GFP(+) (зелёные) внедрившихся ГК.
 
 

Признаки слияния кардиомиоцита (внизу - окраска на X-gal) и мобилизованных ГК (вверху - окраска кардиомиоцитов на alpha-actinin и GFP(+) ГК - зелёный).